T 载体与 目的基因连接成功，测序结果也正确。从新摇菌，提取质粒，在进行双酶切，一直切不下来。
用的是 ClaⅠ ，EcoR Ⅰ 两种酶 体系20酶切 3小时 过夜 都试过了 期待解决
你的引物含有ClaⅠ的酶切位点吗？用载体上的其他酶切位点，双酶切鉴定下看看。也许酶有问题
更多回答
可能是你酶的问题哦，加入酶失活了，切一个星期都没用，建议换另外实验室的试一下。
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