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PCR产物与T载体连不上求助

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PCR产物与T载体连不上求助

2023-04-14 05:02

1个回答

2023-04-14 07:09

前一段时间我也是，不知道为毛，T-A克隆就是不成功。。。以前的以前轻松的事情，前段时间就是塞不进去。后来，我试了平末端克隆，反而长菌了。。菌落数比较少，但是阳性率还行。
由于平末端克隆试剂盒一般小贵，所以我把某个试剂盒提供的载体改造了，只要用EcorV酶切就是平端载体，如果用Eam1101I酶切就是T载体。。嗯。。这样就不用再买T载体或者平端载体了。。哇咔咔。。如果你需要的话站短我吧

相关问答

为什么pcr产物可以直接连t载体

1个回答2022-12-16 10:24

普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。

为什么pcr产物要先连在t载体上

1个回答2023-05-17 02:57

T载体是一种克隆载体，链接后先得到较多的拷贝，可以提高链接表达载体的效率。

罗氏高保真的酶的PCR产物可以和T载体连接吗

2个回答2022-12-24 07:05

不可以，高保真酶产物一般都是平末端。纯化产物加taq酶，buffer和dNTP，72℃反应10~30分钟即可加尾，产物就可以直接与 T载体连接了。

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基因工程中常提到t载体，什么是t载体，t载体有什么作用

1个回答2022-10-29 12:41

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1个回答2022-12-18 21:16

1确认连接体系没有问题.2 确认设计引物的时候两边酶切位点的碱基和保护碱基没有问题.3 考虑PCR产物回收产物浓度提高一点.连T一般很容易的,我也做的单酶切连接,祝成功啦.

T载体是什么？

3个回答2022-10-10 03:58

一段线性双链DNA载体，载体的两端3‘末端各有一个额外的T。因为大部分Taq聚合酶会在PCR产物3’末端添加一个额外的A，所以使用T载体可以比较方便且高效（相对于平末端）进行PCR产物的连接反应，以方...

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