pcr技术电子书

随机引物PCR(arbitrarily
primed
PCR，AP-PCR)是指在对模板顺序一无所知的情况下，通过随意设计或选择一个非特异性引物，在PCR反应体系中，首先在不严格条件下使引物与模板DNA中许多序列通过错配而复性。在理论上，并不一定要求整个引物都与模板复性，而只要引物的一部分特别是3'端有3-4个以上碱基与模板互补复性，既可使引物延伸。
理论上，一旦在两条单链上相距一定距离且有反向复性引物存在，则可在Taq
DNA聚合酶的作用下进行DNA片段的扩增，经1至数轮不严格条件下的PCR循环后，再于严格条件下进行扩增。经DNA测序凝胶电泳分离后，即可得到DNA指纹图，通过对不同来源基因指纹图之间的比较，即可反映出待分析基因组的特征。
RNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息传递过程中的桥梁。tRNA的功能是携带符合要求的氨基酸，以mRNA为模板，合成蛋白质。
了解不？

根据简写的命名原则，
RT PCR指反转录PCR，
qRT PCR指实时荧光定量PCR，
real time PCR指定量PCR，不是反转录PCR

一楼的~real-time PCR不就是RT-PCR吗？！实时定量PCR

中心法则.DNA→RNA【转录,逆转录】 DNA自我复制
外显子,内含子
运载体上
体内基因治疗,体外基因治疗
PCR；原理：半保留复制 条件：模板连,热稳定酶,碱基对,
结果：获得目的基因

什么酶呢？最后酶切组的电泳条带是弥散，是只有质粒条带没有酶切产物条带，还是干脆就是空白？

如果是弥散，最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格，因为掌握不当而产生了星号活性，导致把质粒切碎了。建议查一下所用酶的酶切条件。

如果是有质粒条带而没有短片段条带，也就是说没切开了。可能酶切位点发生了突变，也可能是酶失活了。

如果是空白...我也不知道怎么回事儿了...再重复一次吧。

如果认为之前的步骤都没什么问题，不如直接送测序。比酶切检验还要精确呢。

祝实验顺利。

博凌科为-为你解答：Takara LA Taq酶，体系同说明书。反应程序是：（要求引物Tm值在70度左右，但上下只能浮动2度。Primer 5计算） No. of Cycles Temperature (℃) Duration 1 94 3 min 5 94 30 sec 72 3 min 5 94 30 sec 70 30 sec 72 3 min 25 94 30 sec 68 30 sec 72 3 min 1 72 5 min 1 4 10 min

PCR反应条件为温度、时间和循环次数。

这个情况我也碰到过。当时是我一侧引物序列5`端搞错，但P出来的产物和原来在一个位置，而且亮度也很强！

荧光定量PCR目的：在PCR反应中，无论是定性还是定量分析，分析的都是PCR的终产物。但是有时候想知道的却是未经PCR放大之前的起始模板量，RT-PCR应用而生。