问一个分子生物学的问题,片段连接
2个回答
是否可以这样:在两头再接上相同序列,做成平头的,如下(n 为原序列)
5'cgtacnnnnnnncgtac3'
3'gcatgnnnnnnngcatg5'
然后拿去跑PCR,以自身解链所得单链为引物,退火(可能)得到的部分产物
5'cgtacnnnnnnncgtac3'
___________3'gcatgnnnnnnngcatg5'
能得到延伸,其余产物不变,经一次循环后可能能得到少量
5'cgtacnnnnnnncgtacnnnnnnncgtac3'
3'gcatgnnnnnnngcatgnnnnnnngcatg5'
学生我只是不久前学了点基因工程,无任何实际经验,如果这种方法算是天方夜谈的话,大家聊作看笑话吧...
5'cgtacnnnnnnncgtac3'
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然后拿去跑PCR,以自身解链所得单链为引物,退火(可能)得到的部分产物
5'cgtacnnnnnnncgtac3'
___________3'gcatgnnnnnnngcatg5'
能得到延伸,其余产物不变,经一次循环后可能能得到少量
5'cgtacnnnnnnncgtacnnnnnnncgtac3'
3'gcatgnnnnnnngcatgnnnnnnngcatg5'
学生我只是不久前学了点基因工程,无任何实际经验,如果这种方法算是天方夜谈的话,大家聊作看笑话吧...
你的目的就是要制造一个中频重复片段是吧?
那么你的两端的酶切位点是什么呢?还有你想获得的是同向的重复序列还是随机方向的重复序列呢?如果是随机方向的重复序列,那比较方便,即补平末端加连接酶长时间做平头连接即可获得重复序列。如果不是的话,那么就很难达到你要的目的了。
那么你的两端的酶切位点是什么呢?还有你想获得的是同向的重复序列还是随机方向的重复序列呢?如果是随机方向的重复序列,那比较方便,即补平末端加连接酶长时间做平头连接即可获得重复序列。如果不是的话,那么就很难达到你要的目的了。
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有没有对照控制组?。。怎么确定是载体或者片段的问题,还是ligation的问题,还是转化的问题,还是菌的问题,还是培养基的问题。 还有一般性不推荐用单酶克隆。
接后半段话!谢谢
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