载体构建中，引物设计序列与克隆测序不一致，向您请教！

1、如果测序峰图正常，缺失的G就是引物合成的问题，长片段引物合成时容易出错。
2、开始我也习惯连T载体测序正确后，再酶切连目的载体，但后来直接连目的载体可行，方便。
3、我试过3片段连接的，可以。不过片段大小影响连接，不好连的话还是一段段连吧。

第一个问题，只有一个碱基缺失，克隆测序和引物合成都没有问题；
第二个问题：酶切连接入载体后，克隆过程就完成了；
第三个问题：如果你说的是转化过程的话，应该是先做好连接，再做转化。