表达质粒构建中, 做带有目的基因片段的pcr之前，需要对带有目的基因片段的质粒进行酶切吗？。

2023-01-03 12:10

2个回答

目的基因PCR的时候两头引物就要设计酶切位点了，要不怎么连的上呢。然后用内切酶消化质粒和目的基因，电泳纯化，再用T4连上。

不需要酶切，直接以环形质粒为模板扩增PCR就可以。

相关问答

1个回答2022-09-24 01:30

原子，分子和离子.

2个回答2022-09-04 08:38

什么酶呢？最后酶切组的电泳条带是弥散，是只有质粒条带没有酶切产物条带，还是干脆就是空白？如果是弥散，最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格，因为掌握不当而产生了星号活性，导致把质粒切碎了。建议...

1个回答2022-12-16 14:34

分子，原子，离子

1个回答2023-05-22 05:30

都有可能你可以多做几个对照,如空载体转化、空细胞涂板等等，帮助缩问题小范围你可以询问实验室其他人员，看看酶是否有问题，感受态是否有问题，抗生素是否有问题，等等按你给的线索，菌落很少，很有可能是切...

1个回答2023-04-17 18:52

设计一对引物，针对基因两端（覆盖酶切位点），在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基，扩增以后，酶切产物和空载体，再连接一遍，转化，小提拿去测序。最好上游换另一个内切酶位点，这样方便双酶切检测...

3个回答2022-06-25 09:06

1个回答2022-09-24 04:14

很大的区别。

2个回答2022-06-12 22:00

以前确实有基本粒子一词。但是，随着更基本的粒子不断被发现并取代原来的基本粒子，最基本粒子一词已不再使用了。

1个回答2023-01-18 18:55

同样的问题,我也正经历着,别着急慢慢分析原因. 如果你做得是质粒的构建,我想根本的原因是没有连接上,那得重新做,考虑连接的问题. 对于你的那个5天得菌液,原则上说菌液放久了,质粒可能会丢失,你可以重新...

1个回答2022-10-31 22:29

线性化的跑得最慢。质粒酶切后，和没有酶切的对照相比。应该会多出一条带，这条带应该是跑得最慢的，也就是显得比原来的更大。酶切的不彻底的话，原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看...

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