PCR如何扩增大片段质粒??

设计一对引物，针对基因两端（覆盖酶切位点），在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基，扩增以后，酶切产物和空载体，再连接一遍，转化，小提拿去测序。
最好上游换另一个内切酶位点，这样方便双酶切检测，区别于原来的质粒。

有模板，引物，聚合酶就可以了

如果基因已经已知，那还为什么要在质粒上改造？切下来在单独作突变好了，然后再联回去。突变的话就用重叠引物pcr好了，可以较容易的加几个碱基。扩增大片断的话可以购买 东洋纺 的专门扩增长链DNA的试剂盒好了。