急！菌落PCR有带，可提取的质粒没带！！

2023-01-14 00:47

请问我转化的单菌落做菌落PCR有带，单相对应的菌落提取质粒P不出带是什么原因呀？？引物是特异性的！

1个回答

菌检条带有多大？如果是小条带，小心不要跟Dimer搞混。我还有遇见测序正确的东西P不出的，最后只能换克隆。

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1个回答2023-01-12 19:57

同样的问题，我也正经历着，别着急慢慢分析原因。如果你做得是质粒的构建，我想根本的原因是没有连接上，那得重新做，考虑连接的问题。对于你的那个5天得菌液，原则上说菌液放久了，质粒可能会丢失，你可以重新...

1个回答2023-01-18 18:55

同样的问题,我也正经历着,别着急慢慢分析原因. 如果你做得是质粒的构建,我想根本的原因是没有连接上,那得重新做,考虑连接的问题. 对于你的那个5天得菌液,原则上说菌液放久了,质粒可能会丢失,你可以重新...

1个回答2023-01-20 06:45

你做完菌落PCR以后，电泳完要看看是不是你需要的那一条带，如果这条带是你要的话，你就要拿你用来菌落PCR的菌液拿去测序就可以了，因为我平时也是做菌落PCR，而且提取质粒是检测不出来的，但是菌落PCR以...

1个回答2023-02-10 17:35

先一步步找原因。是实验步聚问题，还是试剂盒的问题，如果是试剂盒的问题，推荐您用鼎国生物的。价格应该还实惠点。

1个回答2022-10-06 17:07

pET 30a 在菌内是偏保守的质粒，拷贝数比较低，建议你做大提质粒，否则带很暗，看不清。还有，既然你已经菌液PCR有条带了，为什么不诱导表达做western来验证下有没有表达产物？

2个回答2023-01-28 07:00

因为转化过程你没出来好加点 kml 再转化提质后分别切2 这样就正确了

2个回答2022-11-28 12:52

没连进去呗可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带调整下退火温度或者直接连T载体测序或者换对引物

1个回答2023-01-23 11:43

无外乎于试剂盒不合适，菌液过少，或过多导致裂解不充分。试剂盒问题比较大，可以其他菌液做个对照，就很清楚了当然如果是农杆菌的话，那质粒量少是很正常的，不像大肠杆菌质粒那么容易提取出来。

2个回答2022-09-04 08:38

什么酶呢？最后酶切组的电泳条带是弥散，是只有质粒条带没有酶切产物条带，还是干脆就是空白？如果是弥散，最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格，因为掌握不当而产生了星号活性，导致把质粒切碎了。建议...

1个回答2022-10-21 11:22

　　转入感受态大肠杆菌细胞中放到LB培养基正常培养

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