为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后，酶切鉴定正确，而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢？着急

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为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后，酶切鉴定正确，而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢？着急

2023-01-28 07:00

加点 kml？但是我转化后菌落长的还可以啊。酶切目的带在1000左右，质粒PCR在750左右了

2个回答

2023-01-28 10:38

不管酶切还是PCR，都是间接的结果。要确定克隆的正确，一定要测序的啊。

你测个序，问题就迎刃而解了。到底是什么问题也就清楚了。

2023-01-28 08:02

因为转化过程你没出来好加点 kml 再转化提质后分别切2 这样就正确了

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pET 30a 在菌内是偏保守的质粒，拷贝数比较低，建议你做大提质粒，否则带很暗，看不清。还有，既然你已经菌液PCR有条带了，为什么不诱导表达做western来验证下有没有表达产物？

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