不用听了直接下载

连不上的因素比较多，首先你要先确保载体和基因片段已经用相同的内切酶处理好，然后再看连接体系中你所加的载体的量和基因片段的量是否合理，一般这两者的比例为1:5-1:10之间比较好，还有就是你的连接体系各种成分是否还有较，连接条件和连接时间是否充分，如果这些都没有问题，那可能就是酶的问题，建议使用TAKARA的连接酶，品质好，连接稳定。

可以，但只能在非盈利机构里转载，请注明转字（论坛里不用注明），还有千万不要用来盈利，不然有可能会被人告，

普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。

载歌载舞
【读音】：zài gē zài wǔ
【解释】：载：动词词头，无实义。边唱歌，边跳舞。形容尽情欢乐。
【出处】：宋·郭藏倩《乐府诗集·北齐南郊乐歌·昭夏乐》：“饰牲举兽，载歌且舞，既舍伊腯，致精灵府。

不可以吧。。
连载其实很难的 对于新手来说
不要一步登天的空想

貌似你要把整理的比较好的草稿去给编辑看
编辑如果认同了会让你去写短篇
短篇出了成绩才会让你去写连载吧

基因片段和载体分别用相同的限制性内切酶切割，产生相同末端，再通过连接酶连接在一起。

分析原因可能有：
1、T载体连接有问题，重新调整目的片段和T载体的比例，重新连接。
2、PCR某种试剂出问题了，以前有个师姐就是这样，怎么也扩不出来，让别人带样扩出来了，原来是Taq 酶出问题了，你也可以确定一下。

怨声载道 → 道不同不相为谋 → 谋事在人，成事在天 → 天有不测风云，人有旦夕祸福 → 福兮祸所伏，祸兮福所倚 → 倚老卖老 →
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所谓“思接千载”就是作者的思路突破时间限制,上下几千年。如唐刘《天上的街市》也同时应用了“思接千载”的写作方法,作者看见眼前的“街灯” 就是形容作者思路非常灵动，非常活跃 是对作者很大的赞誉！

满载而归归正首丘丘山之功功标青史史不绝书书空咄咄咄嗟便办半斤八两量才録用用舍行藏