故事讲述了由“魔汁”引起的冲突及冲突被解决、有情人终成眷属的故事。
音乐一开始用木管乐器奏出四个缓慢的和弦长音，仲夏之夜，月光透过森林神秘而飘渺，隐约出现了一个寂静莫测的世界。
随后，小提琴组在高音区用跳弓快速奏出轻盈灵巧的精灵主题，这个主题贯穿全曲，仿佛花仙和小精灵们在月光下伴着斑驳摇动的树影追逐嬉戏。
突然，大乐队强奏出威严庄重的主题，代表着仙王和仙后，他们在众仙的簇拥下来到了同一片森林，但是这两位王者却因为争夺一个小童而争论不休，不欢而散。印度小童被仙后带走了，仙王为了惩罚仙后叫来了小仙帕克，命他去取“魔汁”（西方传说中，一朵纯洁小白花因为误中了丘比特的爱情之箭，受创伤后而流出的汁液）以此来戏弄仙后。魔汁有一种魔力：如果它滴在睡着的人眼皮上，无论狮子、熊、狼还是公牛，只要醒来第一眼看见的生物，她都会疯狂的爱上它。
单簧管和弦乐交织在一起形成对答，是森林的另一边，青年拉山德和情人赫米娅为了反抗包办婚姻这一雅典苛法私奔来到森林，在树下倾诉衷肠。小号短促有力的质问声是单恋着赫米娅的青年狄米特律斯随之而来，向赫米娅表白。随后还有迷恋着狄米特律斯的海伦娜也追随至此。最有趣的是海伦娜和赫米娅本来是无话不谈的闺蜜。四个年轻人纠缠不清，音乐情绪越来越紧张。
曲风又一转，一段粗犷有力的贝加莫舞曲描述的是波顿和工匠们连夜在排练喜剧，他们计划在提修斯公爵的婚礼上表演。音乐当中有力的高音到低音的大跳结合切分和弦，突出了波顿跳舞时的蠢笨形象，并引起了小仙帕克的反感。帕克一气之下施了魔法竟把波顿变成了一头驴。仙王仙后主题再现，仙后中招了。奥布朗将魔汁滴在了提泰妮娅眼皮上，仙后醒来后疯狂爱上了驴头人身的波顿。
精灵主题再现，这是仙王奥布朗发现了森林中四个年轻人纠缠不清的爱情不对劲，于是命小精灵帕克快去找到海伦娜把花汁滴在她爱的男人眼里。但是帕克却把人搞错了，将花汁滴在了拉山德的眼睛里。可怜的赫米娅一下子受到了完全的冷落，可是海伦娜却得到了过多的爱慕！爱情主题开始向着哀婉凄切的情绪变奏，大管吹出忧郁的音调。中提琴渲染了忧伤暗淡的色调。
音乐开始时的四个和弦再一次出现，又引出了精灵主题。中间的大号吹奏出的是仙王对小精灵帕克的质问，并命令帕克赶快施魔法将一切恢复原貌。这里的爱情主题得到了完整的再现，并且恢复了原来的温柔与真挚。两对恋人终于得到了圆满的爱情结局。
仙王仙后主题也温柔的再现了，仙王解除了仙后的魔法，重修旧好。最后仙王让小精灵帕克将波顿恢复原形，波顿和工匠们高高兴兴回雅典参加提修斯公爵的婚礼表演，当然波顿还是那么的笨拙，滑稽。
爱情主题再现，仙王仙后主题再现，贝加莫舞曲再现。象征一切都圆满和谐了。
音乐最后的尾声用舒缓宁静的旋律，把镜头拉到了雅典城，提修斯公爵和希波丽丹女王的婚礼上，公爵赦免了私奔的赫米娅。弦乐和圆号相继弱奏出悠长的旋律，仿佛在催人入眠，森林又恢复了往日平静，引子中的四个和弦再次响起，仲夏夜之梦幻影渐渐消失。
结尾小彩蛋：
著名的婚礼进行曲有两个版本，一首出自门德尔松的这部歌剧《仲夏夜之梦》的第五幕前奏曲。另一首源于瓦格纳歌剧《罗恩格林》第三幕开始时的一段混声合唱《婚礼大合唱》，因常用作婚礼音乐而得名《婚礼进行曲》，后被改编成管弦乐曲。前者欢快激情，后者庄严肃穆。
按照西方的传统，新娘入场时要奏的是瓦格纳的《婚礼进行曲》。新人步出教堂时要奏门德尔松的《婚礼进行曲》。而在我国大部分婚礼上，仪式开始前所用的就是瓦格纳的版本，而典礼结束时用到的就是门德尔松版本啦。
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