完成《最后的晚餐》四年后，达·芬奇开始创作故事的开头那幅著名的画作《蒙娜·丽莎》。
蒙娜·丽莎是佛罗伦萨一位富商的妻子，也是达·芬奇的好友。达·芬奇刚开始为她画像时，她年仅二十四岁。在这之前不久，蒙娜·丽莎心爱的女儿刚刚夭折，因此她整天闷闷不乐。为了让模特能微微一笑，达·芬奇一边为她画像,一边请乐师和小丑在她旁边表演，想方设法地引发蒙娜·丽莎发自内心的微笑。表演虽然触动了蒙娜·丽莎的心弦，但她的笑也只是一掠而过。令人惊讶的是，达·芬奇竟然准确捕捉并描绘出了蒙娜·丽莎内心深处这微妙的心理活动。
《蒙娜·丽莎》是达·芬奇最喜爱的作品，一直把它留在自己身边。直到他去世后，法国国王弗朗西斯一世花了一万两千个金币，才从达·芬奇弟子那儿买下它，从此被收藏在法国的艺术宫殿卢浮宫中。
达芬奇不仅在绘画艺术上造诣不凡，还擅长雕刻、音乐、发明、建筑，通晓数学、生理、物理、天文、地质等学科，既多才多艺，又勤奋多产。晚年的达·芬奇把自己一生在科学和绘画上的经验，加以整理，写成了5000多页的手稿。这些手稿几乎涉及了当时所有的学科，简直就像一个巨大的知识宝库。
后来，著名的科学家爱因斯坦看到达·芬奇的手稿，感叹道：达·芬奇的科研成果如果在当时就发表的话，科技发展可以提前30-50年。
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