真核表达载体转染293,序列都正确,不表达是什么原因
1个回答
一般的话,原因答题是可以分为两种:
①不表达,从基因上开始分析,无论是用那种宿主表达蛋白,真核表达或是原核表达,都要考虑到基因优化的层面,如果基因本身不适在此系统中表达,那么下游在怎么优化也是不表达的
②表达条件的优化,转染效率是否转染成功,细胞培养细胞生长的状态,这些条件是可以通过自己优化解决的
此外,真核细胞蛋白表达,载体的选择是很重要的,因为利用哺乳动物细胞表达蛋白,你是用的是瞬时转染表达技术,瞬转效率本身也不高,1mg的质粒摇1l也就能得到1mg左右的蛋白,所以载体的选择很关键。
①不表达,从基因上开始分析,无论是用那种宿主表达蛋白,真核表达或是原核表达,都要考虑到基因优化的层面,如果基因本身不适在此系统中表达,那么下游在怎么优化也是不表达的
②表达条件的优化,转染效率是否转染成功,细胞培养细胞生长的状态,这些条件是可以通过自己优化解决的
此外,真核细胞蛋白表达,载体的选择是很重要的,因为利用哺乳动物细胞表达蛋白,你是用的是瞬时转染表达技术,瞬转效率本身也不高,1mg的质粒摇1l也就能得到1mg左右的蛋白,所以载体的选择很关键。
相关问答
构建的原核表达载体,测序也正确,为什么有的就不表达目的蛋白?
这种情况很正常,经常遇到,无非是优化表达条件,换载体或者重新选区目的基因设计引物
为什么真核表达载体不能在原核中表达?
真核基因有内含子,基因不连续。原核细胞基因没有内含子,基因是连续的。所以真核载体要想在真核细胞中表达就必须有内含子
为什么构建的真核表达载体在真核细胞中不表达
有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候,一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后,直接表达成熟肽,表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体...
全文我最近构建真核表达质粒,测序后序列是正确但的,但就是不表达。表达蛋白抗体和标签抗体都检测不到。
你再多挑些斑试试,真核质粒不表达,很多时候是因为转染效率太低。我们这有挑了将近100个才找到表达的
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