构建的原核表达载体，测序也正确，为什么有的就不表达目的蛋白？

2022-09-13 19:01

3个回答

还要分析阅读框有没有问题

还要考虑目的蛋白有无毒性对宿主来说，还有诱导条件等等

这种情况很正常，经常遇到，无非是优化表达条件，换载体或者重新选区目的基因设计引物

相关问答

1个回答2022-09-19 15:25

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达...

4个回答2022-12-07 19:35

你再多挑些斑试试，真核质粒不表达，很多时候是因为转染效率太低。我们这有挑了将近100个才找到表达的

2个回答2022-09-22 22:55

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体...

1个回答2022-09-16 12:15

一般的话，原因答题是可以分为两种： ①不表达，从基因上开始分析，无论是用那种宿主表达蛋白，真核表达或是原核表达，都要考虑到基因优化的层面，如果基因本身不适在此系统中表达，那么下游在怎么优化...

1个回答2022-08-28 03:42

用限制酶分别切割目的基因两侧及运载体，然后在DNA连接酶的作用下就形成了基因表达载体。

2个回答2023-02-22 22:55

你最早的目的基因、质粒什么的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它变多，再做实验，去表达

1个回答2023-01-03 12:10

先克隆目的基因，比如PCR扩增。或者直接从其他载体酶切纯化找到你所要的载体，一般可用TOPO TA载体来直接连接PCR产物。或者使用相应的酶切对应载体完成连接转染细菌，比如感受态的E c...

2个回答2022-08-21 20:06

真核基因有内含子，基因不连续。原核细胞基因没有内含子，基因是连续的。所以真核载体要想在真核细胞中表达就必须有内含子

1个回答2023-01-08 02:24

有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切，然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上，再从过度载体抢切下目的基因，最后再连接到酶切过的表达载体上。

2个回答2022-09-10 20:32

第一种方式即将基因和可以表达的载体如PET，PGEX等酶切后直接连接，再转化入感受态细胞第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接，再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体，酶切后连接，转化入感受态细胞...

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