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如何构建过表达载体？（分子生物学）

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如何构建过表达载体？（分子生物学）

2022-09-10 20:32

2个回答

2022-09-11 01:14

1 可以用酶切连接法（传统），也就是将目的基因和载体都用相同的限制性酶（或同尾酶）酶切，然后用T4连接酶连接，转化到感受态细胞，筛选出阳性克隆；
2 重组法，利用同源重组将外源基因整合到表达载体，外源基因可以先联到一个含重组位点的中间载体，然后用重组酶将其置换到表达载体，转化到感受态细胞，筛选出阳性克隆

2022-09-10 23:46

第一种方式即将基因和可以表达的载体如PET，PGEX等酶切后直接连接，再转化入感受态细胞
第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接，再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体，酶切后连接，转化入感受态细胞，这种情况针对，直接PCR产物连不上的情况

相关问答

如何构建一个基因的过表达载体

1个回答2022-08-28 03:42

用限制酶分别切割目的基因两侧及运载体，然后在DNA连接酶的作用下就形成了基因表达载体。

为什么要先构建克隆载体再用表达载体

2个回答2023-02-22 22:55

你最早的目的基因、质粒什么的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它变多，再做实验，去表达

将目的基因构建在表达载体上的方法有哪些

1个回答2023-01-08 02:24

有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切，然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上，再从过度载体抢切下目的基因，最后再连接到酶切过的表达载体上。

为什么构建的真核表达载体在真核细胞中不表达

2个回答2022-09-22 22:55

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体...

质粒载体如何构建

3个回答2022-09-07 05:22

首先需要一个表达载体，看你需要原核还是真核，看情况选择，然后有获得你需要的目的基因，在两端加酶切位点，将目的基因与载体连接到一起后就完成了质粒载体的构建了。

表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时？时间长一点有什么影响么？

1个回答2023-01-30 20:36

最好是12h左右，按说应该是时间越长越好，会有更多的DNA连接，但考虑到DNA的稳定性，还是12h左右较好

为什么我构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白

1个回答2022-09-19 15:25

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构建的原核表达载体，测序也正确，为什么有的就不表达目的蛋白？

3个回答2022-09-13 19:01

这种情况很正常，经常遇到，无非是优化表达条件，换载体或者重新选区目的基因设计引物

什么是建构游戏？建构游戏的搭建方法

1个回答2024-02-13 05:04

建构游戏是儿童利用各种建筑材料，如积木、积塑、沙土、金属部件等，按自己的需要、兴趣和意愿进行建筑、构造的游戏。

如何将目的基因与已经构建好的载体拼接？

4个回答2022-09-15 11:28

设计引物，引物两端带有设计好的酶切位点，找个有目的基因的细胞，提了ran，然后把目的片段p出来，然后跑胶，试剂盒回收目的片段。把载体和目的片段用同样的双酶切，再跑胶，回收切开的载体和目的片段，连接吧。

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