如何构建过表达载体？（分子生物学）

2022-09-10 20:32

2022-09-11 01:14

1 可以用酶切连接法（传统），也就是将目的基因和载体都用相同的限制性酶（或同尾酶）酶切，然后用T4连接酶连接，转化到感受态细胞，筛选出阳性克隆；
2 重组法，利用同源重组将外源基因整合到表达载体，外源基因可以先联到一个含重组位点的中间载体，然后用重组酶将其置换到表达载体，转化到感受态细胞，筛选出阳性克隆

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2022-09-10 23:46

第一种方式即将基因和可以表达的载体如PET，PGEX等酶切后直接连接，再转化入感受态细胞
第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接，再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体，酶切后连接，转化入感受态细胞，这种情况针对，直接PCR产物连不上的情况

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