如何构建过表达载体?(分子生物学)
第一种方式即将基因和可以表达的载体如PET,PGEX等酶切后直接连接,再转化入感受态细胞
第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接,再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体,酶切后连接,转化入感受态细胞,这种情况针对,直接PCR产物连不上的情况
第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接,再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体,酶切后连接,转化入感受态细胞,这种情况针对,直接PCR产物连不上的情况
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1 可以用酶切连接法(传统),也就是将目的基因和载体都用相同的限制性酶(或同尾酶)酶切,然后用T4连接酶连接,转化到感受态细胞,筛选出阳性克隆;
2 重组法,利用同源重组将外源基因整合到表达载体,外源基因可以先联到一个含重组位点的中间载体,然后用重组酶将其置换到表达载体,转化到感受态细胞,筛选出阳性克隆
2 重组法,利用同源重组将外源基因整合到表达载体,外源基因可以先联到一个含重组位点的中间载体,然后用重组酶将其置换到表达载体,转化到感受态细胞,筛选出阳性克隆
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