表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时？时间长一点有什么影响么？

2023-01-30 20:36

1个回答

最好是12h左右，按说应该是时间越长越好，会有更多的DNA连接，但考虑到DNA的稳定性，还是12h左右较好

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2个回答2023-02-22 22:55

你最早的目的基因、质粒什么的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它变多，再做实验，去表达

1个回答2022-08-28 03:42

用限制酶分别切割目的基因两侧及运载体，然后在DNA连接酶的作用下就形成了基因表达载体。

2个回答2022-09-22 22:55

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体...

1个回答2023-01-08 02:24

有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切，然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上，再从过度载体抢切下目的基因，最后再连接到酶切过的表达载体上。

2个回答2022-09-10 20:32

第一种方式即将基因和可以表达的载体如PET，PGEX等酶切后直接连接，再转化入感受态细胞第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接，再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体，酶切后连接，转化入感受态细胞...

4个回答2022-09-15 11:28

设计引物，引物两端带有设计好的酶切位点，找个有目的基因的细胞，提了ran，然后把目的片段p出来，然后跑胶，试剂盒回收目的片段。把载体和目的片段用同样的双酶切，再跑胶，回收切开的载体和目的片段，连接吧。

2个回答2023-04-19 00:10

要构建重组载体的目的就是把目的基因连到载体上，所以最有效的重组dna是目的基因-载体。目的基因-目的基因和载体-载体都是失败的结果，这种结果的产生相对导致基因-载体的结果产生率下降。一般做重组载体选...

1个回答2022-09-19 15:25

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达...

3个回答2022-09-13 19:01

这种情况很正常，经常遇到，无非是优化表达条件，换载体或者重新选区目的基因设计引物

1个回答2023-05-12 01:48

肯定是开环，不然怎么连接。连接的原理就是试剂盒中的载体pMD19-T是已经经过内切酶EcoRv反应了的，并且在露出T的一端继续添加几个T，而我们的PCR反应中，在聚合酶的作用下，会在一端添加A，这样它...

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