为什么pcr扩增后不直接进入表达载体，而要经过克隆载体呢？关键原因是什么呢？谢谢

已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切（选要相同的限制性内切酶对两者进行切割）→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接（一般选用T4连接酶）→大肠杆菌感受态细胞的制...

你的问题有点难以理解。 PCR怎么做要看你的目的啊，如果从基因组中扩基因，连个鸟载体，当然是直接扩增。如果你要获得全长序列，当然要载体，否则首尾的序列不可知。 至于“不加载体可以不加引物”就不知道你在...

那要看你用什么方式构载体。如果用酶切连接的方式，可以直接酶切。如果用同源重组，应该是要PCR的

普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。

基因克隆上去没有原因，克隆不上去就不好说清楚了。 对于这种情况，直接交给专业的公司做就行了，也就千把块钱，时间也就是1-2周。我们实验室是在禾船生物克隆的，非常便捷。

不用的，因为你PCR的时候加的 Tag酶，在扩增过程中它会在末端加上A... T vector就会与A结合了 你可以在下一步步骤中，选择酶切位点去剪切后 再与你的目的载体连接。

你最早的目的基因、质粒什么的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它变多，再做实验，去表达

一个是纯化和扩大培养，一个就是为了获得想要的dna片段，弄清序列

基因克隆的步骤： 1、获取目的基因； 2、将目的基因与载体连接； 3、重组体载入受体细胞； 4、重组体的筛选、克隆。 具体到载体连接这一步，将酶切后的载体与目的片段加入相应的连接体系中就可以了。

PCR产物直接测序，引物端约有几十个碱基是测不出来的，如果你恰好关注这个位置，那么或者从另一端测通（你的产物不长），或者克隆测序 此外，很多时候由于PCR产物不专一，直接测序效果不好，而克隆测序没这个...