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肯定是收费的

净网活动中……被挂了

接二连三
一个接着一个，接连不断。
[拼音]
jiē èr lián sān
[出处]
清·曹雪芹《红楼梦》第九十九回：“贾母还要将李纨等挪过来；为着元妃薨后；家中事情接二连三；也无暇及此。”
[例句]
参赛的队员接二连三地冲过了终点。
[近义]
连续不断 连三并四 源源不断 接踵而至 ...
[反义]
后继无人 断断续续 后继有人

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奇迹出问题了。

t载体就是T-DNA，是一类可以重组到受体生物染色体上的载体，通常被应用于植物的基因重组过程中。

T载体又称T-vector。聚合酶链反应产物的克隆运载体，线性化后两侧3′端各多出一个脱氧胸苷酸(T)。由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A)，与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率。

T载体是一种克隆载体，也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体，它不能大量表达。多用于克隆PCR产物，一般用一些常见的载体改造成的，一般的DNA聚合酶没有3'-5'核酸外切酶活性，即酶的校正活性，在PCR产物3'末端以非模板依靠方式加上一个腺苷酸残基（A），这样PCR产物的3'腺苷酸可和T-载体的3'胸腺嘧啶 互补，T-载体系统进行有效连接的基础正是这种碱基配对作用。相反，有校正活性的聚合酶将移去这个3' 突出端，产生平端PCR产物，这种产物不能直接用T-载体系统进行克隆。
假如想要一PCR扩增基因的产物大量表达，常见的方法是先将PCR产物连入T载体扩增（所用T载体需事先设计好酶切位点），再用相应酶切下目的片段，然后连入以同样酶切处理后的表达载体大量表达蛋白质。

1确认连接体系没有问题.2 确认设计引物的时候两边酶切位点的碱基和保护碱基没有问题.3 考虑PCR产物回收产物浓度提高一点.连T一般很容易的,我也做的单酶切连接,祝成功啦.

一段线性双链DNA载体，载体的两端3‘末端各有一个额外的T。因为大部分Taq聚合酶会在PCR产物3’末端添加一个额外的A，所以使用T载体可以比较方便且高效（相对于平末端）进行PCR产物的连接反应，以方便克隆的构建或检测。

应该是分子克隆用的载体，使用前是双链线性片段，上面有必要的测序或表达元件，两头是黏末端，各在3'有一个游离的t（故名t载体）。因为pcr实验中用的聚合酶大部分都是taq和taq的同类酶，会在pcr产物的3'末端自动加一个a，这样pcr产物纯化之后无需酶切就可以与t载体连接，连接结果为带有目的片段的环状质粒载体。之后转化挑克隆，进行表达和测序。