修罗武神t×t全集免费下载

接二连三
一个接着一个，接连不断。
[拼音]
jiē èr lián sān
[出处]
清·曹雪芹《红楼梦》第九十九回：“贾母还要将李纨等挪过来；为着元妃薨后；家中事情接二连三；也无暇及此。”
[例句]
参赛的队员接二连三地冲过了终点。
[近义]
连续不断 连三并四 源源不断 接踵而至 ...
[反义]
后继无人 断断续续 后继有人

T载体又称T-vector。聚合酶链反应产物的克隆运载体，线性化后两侧3′端各多出一个脱氧胸苷酸(T)。由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A)，与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率。

T载体是一种克隆载体，也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体，它不能大量表达。多用于克隆PCR产物，一般用一些常见的载体改造成的，一般的DNA聚合酶没有3'-5'核酸外切酶活性，即酶的校正活性，在PCR产物3'末端以非模板依靠方式加上一个腺苷酸残基（A），这样PCR产物的3'腺苷酸可和T-载体的3'胸腺嘧啶 互补，T-载体系统进行有效连接的基础正是这种碱基配对作用。相反，有校正活性的聚合酶将移去这个3' 突出端，产生平端PCR产物，这种产物不能直接用T-载体系统进行克隆。
假如想要一PCR扩增基因的产物大量表达，常见的方法是先将PCR产物连入T载体扩增（所用T载体需事先设计好酶切位点），再用相应酶切下目的片段，然后连入以同样酶切处理后的表达载体大量表达蛋白质。

t载体就是T-DNA，是一类可以重组到受体生物染色体上的载体，通常被应用于植物的基因重组过程中。

1确认连接体系没有问题.2 确认设计引物的时候两边酶切位点的碱基和保护碱基没有问题.3 考虑PCR产物回收产物浓度提高一点.连T一般很容易的,我也做的单酶切连接,祝成功啦.

一段线性双链DNA载体，载体的两端3‘末端各有一个额外的T。因为大部分Taq聚合酶会在PCR产物3’末端添加一个额外的A，所以使用T载体可以比较方便且高效（相对于平末端）进行PCR产物的连接反应，以方便克隆的构建或检测。

应该是分子克隆用的载体，使用前是双链线性片段，上面有必要的测序或表达元件，两头是黏末端，各在3'有一个游离的t（故名t载体）。因为pcr实验中用的聚合酶大部分都是taq和taq的同类酶，会在pcr产物的3'末端自动加一个a，这样pcr产物纯化之后无需酶切就可以与t载体连接，连接结果为带有目的片段的环状质粒载体。之后转化挑克隆，进行表达和测序。

我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。

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测序结果不一致，这个直接咨询给你测序的公司就行了。如果测序结果可信度高，这个相似性就太低了。
测序完成后是否有终止密码子就要看你测序的这一段是否包含了终止密码子了，这个需要你自己分析。

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