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1、影响生化活性物质提取效率的因素①温度(重点)。多数物质的溶解度随提取温度的升高而增加。另外较高的温度可以降低物料的黏度,有利于分子扩散和机械搅拌,所以对一些植物成分,某些较耐热的生化成分,如多糖类可以用浸煮法提取。有些生化物质在提取时,需要酶解激活,如胃蛋白酶的提取,温度可以控制在30~40℃。应用有机溶剂提取生化成分时,一般在较低的温度下进行提取,一方面是为了减少溶剂挥发损失和生产安全,另一方面也是为了减少活力损失。②酸碱度。多数生化物质在中性条件下较稳定,所以提取用的溶剂系统原则上应避免过酸或过碱,pH一般应控制在4~9范围内。为了增加目的物的溶解度,往往要避免在目的物的等电点附近进行提取。③盐浓度。盐离子的存在能减弱生物分子间离子间及氢键的作用。稀盐溶液对蛋白质等生物大分子有助溶作用。
2、生物制药工艺中分离制备方法的特点①生物材料组成非常复杂,常无固定操作方法可循。②有些化合物在生物材料中含量极微,因此分离操作步骤多,不宜获得高收率。③生物活性成分分离后,易变性破坏。④生物制药中的分离方法几乎都在溶液中进行。⑤为了保护目的物的生理活性及结构上的完整性,生物治疗中的分离方法多采用温和的“多阶式”方法进行,即常说的“逐级分离”方法。⑥生物产品最后均一性的证明与化学上纯度的概念不完全相同,因生物分子对环境反应十分敏感,结构与功能关系比较复杂。
3、生物大分子分离纯化的主要原理①根据分子形状和大小不同进行分离。如差速离心与超离心、膜分离(透析、电渗析)与超滤法、凝胶过滤法。②根据分子电离性质(带电性)的差异进行分离。③根据分子极性大小及溶解度不同进行分离。④根据物质吸附性质的不同进行分离。⑤根据配体特异性进行分离——亲和层析法。
4、菌种的保藏方法中,适合长期保存可靠的是液氮超低温保藏法。
5、灭菌的方法①加热灭菌。②辐射灭菌。③介质过滤灭除菌。④化学灭菌法。(重点)其中化学灭菌法的适用范围:主要是用来进行皮肤表面、器具及无菌区域的灭菌,不能用于培养基的灭菌。
6、中试放大的概念:是由小试转入工业化生产的过渡性研究工作,对小试工艺能否成功地进入规模化生产至关重要。
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