连接到T载体上面后，做双酶切，条带不正确，目的片段变大是什么原因

2022-08-12 12:17

2个回答

用的是T-simple吗？如果不是simple载体，有可能切开的不是你引入的的没切位点，而是载体本身的

为啥要连到T载体上做双酶切直接切不就得了跑胶只是看个大概的大小啦不准的变大几百都算正常只要你测序没问题就可以了

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1个回答2022-08-02 15:43

酶发挥作用时，外部环境要有对应的温度，PH，如果外部环境不合适，酶也不能正常发挥作用。

1个回答2022-09-11 05:48

两条带都收了然后测序呗

2个回答2022-09-20 16:33

将原题贴上，话说的不明不白,我有点无法理解。如果理论上：用用sacⅡ单酶后能出现你的目的条带，但实际上没有酶切出目的条带（t载体有），我认为原因是T载体自连，你的目的条带没有连上！建议重连，并用菌落P...

4个回答2022-11-28 12:12

我们用天根公司的胶回收试剂盒，回收目的基因及载体双酶切后的产物用于连接，连接体系如下：一般载体1微升，目的基因8微升左右（没.测OD）,用T4DNA连接酶（购于TaKaRa公司）1微升，再加酶缓冲液（...

1个回答2022-09-23 04:51

理论上讲PCR产物可以直接酶切连接反应。但是，以PCR产物酶切的时候没有办法证明双酶切是否成功、彻底（PCR产物会有ployA的存在必须切掉，但是PCR产物和酶切产物大小差别不大）。而以T载体为媒介...

2个回答2022-07-14 19:22

可能是你酶的问题哦，加入酶失活了，切一个星期都没用，建议换另外实验室的试一下。

2个回答2022-12-24 07:05

不可以，高保真酶产物一般都是平末端。纯化产物加taq酶，buffer和dNTP，72℃反应10~30分钟即可加尾，产物就可以直接与 T载体连接了。

1个回答2023-04-27 07:35

应为PCR扩增出来的是混合物,酶切回收后才基本是纯的目的片段. 载体一般不用PCR扩增,一般是质粒来源,也需要用切口一致的酶消化回收. 之后连起来就好了

2个回答2022-10-28 13:19

应该是PCR的杂带。这种情况的原因可能很多,比如引物设计的特异性不好,或者退火温度不合适等。应该是PCR的杂带。这种情况的原因可能很多,比如引物设计的特异性不好,或者退火温度不合适等。

1个回答2022-10-27 20:41

可能是质粒在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化.因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增.建议你做个测序.

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