T 载体与 目的基因连接成功，测序结果也正确。从新摇菌，提取质粒，在进行双酶切，一直切不下来。
用的是 ClaⅠ ，EcoR Ⅰ 两种酶 体系20酶切 3小时 过夜 都试过了 期待解决
2个回答
可能是你酶的问题哦，加入酶失活了，切一个星期都没用，建议换另外实验室的试一下。
你的引物含有ClaⅠ的酶切位点吗？用载体上的其他酶切位点，双酶切鉴定下看看。也许酶有问题
相关问答
为什么质粒双酶切后显得更大了？
线性化的跑得最慢。 质粒酶切后，和没有酶切的对照相比。应该会多出一条带，这条带应该是跑得最慢的，也就是显得比原来的更大。酶切的不彻底的话，原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看...
全文为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后，酶切鉴定正确，而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢？着急
因为 转化过程你没出来好 加点 kml 再转化 提质后 分别切2 这样就正确了
质粒双酶切后怎么会这个样子
酶切前,质粒电泳图一般是三条条带,并认为这三条带从上到下一次是线性、开环、超螺旋.其实可能会比这条带更多些,可以认为是中间复合体状态. 酶切后,因为超螺旋状态的质粒被切成线性,所以条带会有一条条带.如...
全文我的3个质粒测序结果都正确，但是做双酶切结果只有一个能切下来DNA片段，为什么呢?
这个可能性太多了吧. 这个不好说啊.你得一个条件一个条件的排除
重组质粒后为什么还需要双酶切，PCR鉴定并测序分析
重组质粒是把载体质粒酶切开，连接上PCR片段，然后转化感受态细胞，培养后提质粒获得的，这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了，是否转化成功了，只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才...
全文双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么
可能是两个载体互连了,你酶切了跑胶分析一下长度就清楚了. 原因基本跑不了载体互连、多个片段互连,或者根本没提出来,而是把细菌基因组给弄出来了,这样你就要检查一下提质粒的过程,仔细看一下胶上有没有条...
全文双酶切连接后转化，长出了菌落，但提质粒跑电泳，分子量比目的质粒大很多，为什么
可能是两个载体互连了，你酶切了跑胶分析一下长度就清楚了。 原因基本跑不了载体互连、多个片段互连，或者根本没提出来，而是把细菌基因组给弄出来了，这样你就要检查一下提质粒的过程，仔细看一下胶上有没有条带什...
全文连接转化后提质粒做酶切，可以切出带，做质粒PCR却P不出来，为什么
都有可能 你可以多做几个对照,如空载体转化、空细胞涂板等等，帮助缩问题小范围 你可以询问实验室其他人员，看看酶是否有问题，感受态是否有问题，抗生素是否有问题，等等 按你给的线索，菌落很少，很有可能是切...
全文双酶切质粒后电泳 的问题
很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了，因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。
一个质粒和一个目的基因，上面都有两种酶的切割位点，为什么用一种酶切后，再连接，有三种连接产物，而...
连接产物有:质粒和质粒连，目的基因和目的基因连，质粒和目的基因连. 至于你说的用两种酶切的产物,需要具体看酶的位置关系再作判断,情况就多了
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