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双酶切连接后转化，长出了菌落，但提质粒跑电泳，分子量比目的质粒大很多，为什么

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双酶切连接后转化，长出了菌落，但提质粒跑电泳，分子量比目的质粒大很多，为什么

2022-09-27 14:25

2个回答
2022-09-27 19:12
可能是两个载体互连了，你酶切了跑胶分析一下长度就清楚了。
原因基本跑不了载体互连、多个片段互连，或者根本没提出来，而是把细菌基因组给弄出来了，这样你就要检查一下提质粒的过程，仔细看一下胶上有没有条带什么的。
不着急，原因很多，逐个分析。
2022-09-27 18:48
目的质粒是什么？
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双酶切质粒后电泳 的问题
2个回答2022-08-31 16:57
很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了，因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。
连接转化后提质粒做酶切，可以切出带，做质粒PCR却P不出来，为什么
1个回答2023-05-22 05:30
都有可能 你可以多做几个对照,如空载体转化、空细胞涂板等等，帮助缩问题小范围 你可以询问实验室其他人员，看看酶是否有问题，感受态是否有问题，抗生素是否有问题，等等 按你给的线索，菌落很少，很有可能是切...
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为什么质粒双酶切后显得更大了？
1个回答2022-10-31 22:29
线性化的跑得最慢。 质粒酶切后，和没有酶切的对照相比。应该会多出一条带，这条带应该是跑得最慢的，也就是显得比原来的更大。酶切的不彻底的话，原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看...
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质粒双酶切后怎么会这个样子
1个回答2022-12-27 10:50
酶切前,质粒电泳图一般是三条条带,并认为这三条带从上到下一次是线性、开环、超螺旋.其实可能会比这条带更多些,可以认为是中间复合体状态. 酶切后,因为超螺旋状态的质粒被切成线性,所以条带会有一条条带.如...
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质粒提取的问题：我是制感受态细胞转化之后再提取质粒，铺板有单菌落，摇菌也能摇浑，但是就提不出质粒
1个回答2023-02-10 17:35
先一步步找原因。是实验步聚问题，还是试剂盒的问题， 如果是试剂盒的问题，推荐您用鼎国生物的。 价格应该还实惠点。
为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后，酶切鉴定正确，而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢？着急
2个回答2023-01-28 07:00
因为 转化过程你没出来好 加点 kml 再转化 提质后 分别切2 这样就正确了
转化后菌液pcr有目的条带，然后提质粒和双酶切验证。但是没有得到目的条带。
1个回答2022-11-14 05:01
1.用水不会有太大影响，只是质粒在水中保存不如在elution中稳定，最好还是用试剂盒的elution；2.你提的质粒是连有目的基因的话，可以空载在前，中间是marker，后边重组质粒，一般如果目的基...
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为什么每次做转化后菌落PCR有带，但是提质粒后就P不出。
1个回答2023-01-20 06:45
你做完菌落PCR以后，电泳完要看看是不是你需要的那一条带，如果这条带是你要的话，你就要拿你用来菌落PCR的菌液拿去测序就可以了，因为我平时也是做菌落PCR，而且提取质粒是检测不出来的，但是菌落PCR以...
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为什么克隆菌总是提不出质粒
1个回答2023-01-23 11:43
无外乎于试剂盒不合适，菌液过少，或过多导致裂解不充分。 试剂盒问题比较大，可以其他菌液做个对照，就很清楚了 当然如果是农杆菌的话，那质粒量少是很正常的，不像大肠杆菌质粒那么容易提取出来。
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