具有3'到5‘外切活性DNA聚合酶的PCR产物不能用末端加A尾活性连到T载体上吗

产物和载体都是两条DNA链，产物带A的链与载带T的链互补配对，产物带A的链的互补链（即5‘端）与载体带T的链连接的，你自己在纸上画画

可以的。 DNA连接酶分为两类，一类是E。coli DNA连接酶，只能连接黏性末端；一类是T4 DNA连接酶，既能连接黏性末端，又能连接平末端，但连接平末端之间的效率比较低。

不可以，高保真酶产物一般都是 平末端 。纯化产物加taq酶，buffer和dNTP，72℃反应10~30分钟即可加尾，产物就可以直接与 T载体 连接了。

普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。

前一段时间我也是，不知道为毛，T-A克隆就是不成功。。。以前的以前轻松的事情，前段时间就是塞不进去。后来，我试了平末端克隆，反而长菌了。。菌落数比较少，但是阳性率还行。 由于平末端克隆试剂盒一般小贵，...

T载体是一种克隆载体，链接后先得到较多的拷贝，可以提高链接表达载体的效率。

可能是质粒在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化.因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增.建议你做个测序.

我们用天根公司的胶回收试剂盒，回收目的基因及载体双酶切后的产物用于连接，连接体系如下：一般载体1微升，目的基因8微升左右（没.测OD）,用T4DNA连接酶（购于TaKaRa公司）1微升，再加酶缓冲液（...

什么酶呢？最后酶切组的电泳条带是弥散，是只有质粒条带没有酶切产物条带，还是干脆就是空白？ 如果是弥散，最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格，因为掌握不当而产生了星号活性，导致把质粒切碎了。建议...

酶发挥作用时，外部环境要有对应的温度，PH，如果外部环境不合适，酶也不能正常发挥作用。