我做出来的PCR产物跑胶能出现清晰地条带,为什么测序公司不能测序,说是信号中断,什么原因?
3个回答
原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应(测序反应本身也是PCR反应)二次聚合酶的打滑现象。 原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失。出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的。
当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去。这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序。或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题。
当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去。这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序。或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题。
多大的条带 拿通用引物去测一下 可能是里面有loop结构
多大的片段啊,可能是片段太大,可以多设计几条引物!
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为什么对PCR产物直接测序没有测序信号
原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应(测序反应本身也是PCR反应)二次聚合酶的打滑现象.原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失.出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的. ...
全文克隆测序和PCR产物直接测序有哪些不一样
众所周知PCR圹增程现错配现象能所错配都发同位置PCR片段直接测序其结PCR片段众混合物结某点现几十错配现象数 (或许几十万)点应该确测序错配现象反映 PCR片段直接测序结反映PCR用模板原始结PCR...
全文为什么pcr可以,但是测序没有结果
这个情况我也碰到过。当时是我一侧引物序列5`端搞错,但P出来的产物和原来在一个位置,而且亮度也很强!
cDNA测序,回收的cDNA跑胶都有条带,送菌液去公司测序说是信号弱测不出来是怎么回事啊?
浓度不够或者条带不单一,测序不是说能看到条带就能测的,如果没有明显的主测序峰也算信号弱。
请问PCR产物直接测序和克隆后再测序有什么区别,用PCR产物直接测序不是更省时间吗,省得再连到载体上了啊
PCR产物直接测序,引物端约有几十个碱基是测不出来的,如果你恰好关注这个位置,那么或者从另一端测通(你的产物不长),或者克隆测序 此外,很多时候由于PCR产物不专一,直接测序效果不好,而克隆测序没这个...
全文PCR片段测序信号衰减的原因有哪些啊?
片段里有没有特殊结构啊?
什么是深测序和重测序, 以及降解组测序
深度测序是指对一个基因组进行多次覆盖测序,例如基因组一共只有a个碱基对,却测了4a个碱基对,相当于每个碱基对平均都被测了四次,这有利于对基因组的拼接,提高测序结果的准确性。 重测序是指一个物种的基因...
全文请问为什么质粒测序失败,但是以质粒为模板扩增送pcr产物测序却可以
我的也是这样,你的问题解决了吗
为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序?
补充一个更重要和实际的考虑:实际测序中,可靠的测序结果往往是从引物后二三十个碱基才开始的。如果片段比较长,超过一次测序能力如七八百之外,即使双向测序也无法获得引物(排除非特异扩增)或紧邻引物处的序列时...
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