端粒酶讲解

线性化的跑得最慢。
质粒酶切后，和没有酶切的对照相比。应该会多出一条带，这条带应该是跑得最慢的，也就是显得比原来的更大。酶切的不彻底的话，原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看到的应该是超螺旋，所以显的比较小：）zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快，其次是线性的DNA，最后跑的最慢的是带缺口（即开环）的。用碱裂解法提取质粒看不到线性的带，只有其余的两条，但不一定是那一条亮。
如果你的超螺旋那条特别亮，酶切后同样大小的DNA片段，由于超螺旋变为线性，电泳就会显示比超螺旋的带大。

DNA连接酶
平末端也可以用DNA连接酶连接，不过效率很低，连接条件需要摸索，一般加入更大量的连接酶还可以加入PEG作为凝聚剂
常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。

酶切前,质粒电泳图一般是三条条带,并认为这三条带从上到下一次是线性、开环、超螺旋.其实可能会比这条带更多些,可以认为是中间复合体状态.
酶切后,因为超螺旋状态的质粒被切成线性,所以条带会有一条条带.如果是双酶切,或是质粒上的酶切位点比较多的话,会有两条或更多条带.
重组质粒是把载体质粒酶切开，连接上PCR片段，然后转化感受态细胞，培养后提质粒获得的，这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了，是否转化成功了，只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。
测序是更准确的方法，一般不用而已。

可以的。
DNA连接酶分为两类，一类是E。coli
DNA连接酶，只能连接黏性末端；一类是T4
DNA连接酶，既能连接黏性末端，又能连接平末端，但连接平末端之间的效率比较低。

很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了，因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。

一切生物的生命活动都离不开酶，而所有的生物的体内，不论是低等生物还是高等生物，都有成千上万的酶参加生物化学的反应。虽然酶这样普遍地存在，而发现酶却是250年前的事。

1750年，意大利生物学家列俄牟尔研究了鹰的消化过程。鹰是食肉性的猛禽，有十分尖利的爪和喙，但没有牙齿，吃肉时，只把猎物撕裂，连毛带骨吞入胃中。但毛和骨在胃中经过一段时间就被消化了，这是什么东西在起作用呢?列俄牟尔设计了一个实验，对鹰的消化过程进行观察。

列俄牟尔取一个金管，金管内放上碎肉，两端开口处用金丝网封住，他让鹰吞下金管，经过一些时间，再把金管取出。结果，发现管内充满了澄澈的液体，而碎肉却不见了。

列俄牟尔这样解释这个现象：金管阻止了胃对碎肉的直接研磨，只有胃液可以进入金管中，所以是胃液消化了碎肉。因此，他认为胃液中一定存在一种能消化肉的物质，但还不知道这物质是什么?

1824年，科学家斯普劳斯尔证明胃液中有酸。11年之后，德国科学家施旺从胃液中提取到一种粉末，它对肉有特别强的消化作用，但肯定不是酸。施旺称它为胃蛋白酶。酶就这样被发现了。后来又陆续发现能消化淀粉的淀粉酶以及其它多种酶。

一个以上基因座位编码的酶的不同形式，具有功能相同而结构和理化性质不同的一类酶。

中外劳动人民在远古时代已经将含糖或含淀粉的食物酿造成酒和醋。牛吃进去的是草，挤出来的却是富含蛋白质、脂肪的奶。人类也在把吃进的食物转变成自身成长所需的物质。
可是，一旦离开生物细胞，想在试管或烧杯里进行这些转变，那就难了。
生物细胞何以具有这些化学反应的神奇能力？是什么东西在生物细胞里面起着促进这些化学反应的奇特作用？
是生物催化剂——酶。
人们认识酶是从酵母开始的。酵母本是发酵之母的意思。它是含有酵母菌体的黄白色软固体。早在1680年，荷兰自然科学家、微生物学家列文虎克用自己设计的显微镜观察酵母细胞和细菌，但未能认识到它们是有生命的有机体。1857年，法国微生物学家、化学家巴斯德证明酵母是一种有生命的有机体，强调发酵的过程是活细胞的作用。
到1897年，德国化学家布希纳将酵母细胞用砂子磨成粉，加水制成糊状，放进布袋中挤压出液体，确定这种液体产生醇发酵，并把它加热到30~35℃，干燥后活性也没有破坏，称它为“酶”，是“在酵母中”的意思。
这就证明发酵并不一定需要活细胞的作用，只是活细胞中存在酶的作用。
在这期间里，另一些酶也先后分离出来。例如1833年，法国化学家帕扬和佩索兹从麦芽中分离出淀粉糖酶；1867年德国生理学家屈内从胰液中分离出胰蛋白酶。
从此，酶是一种化学物质开始被人们认识。
英国生物化学家哈登在1911年证明酵母酶的活性在透析后失去。他利用透析的方法把酵母酶分离成大小两种分子，小分子的活性在煮沸后仍然保留，而大分子的活性在煮沸后就失去，说明小分子对于酶的活性是必需的。他认为大分子是蛋白质，小分子是非蛋白质，并把小分子称为“辅酶”。
之后，德国出生的瑞典生物化学家奥伊勒·歇尔平提纯了哈登分离出来的辅酶，确定这种辅酶是糖和磷酸的特殊酯。他还解释了辅酶的辅助作用是生物活性物质的助手。
奥伊勒·歇尔平和哈登因辅酶的研究共获1929年诺贝尔化学奖。
直到1929年美国生物化学家萨姆纳分离出结晶的分解尿素的尿素酶后，才给酶是一种物质、是一种蛋白质作出了肯定答复。
萨姆纳17岁时在一次射击事故中失去了左手臂，但他执意学习化学，进行化学实验。1917年，他开始了分离纯酶的工作，选择了能把尿素催化分解成氨和二氧化碳的尿素酶。这种酶在刀豆中大量存在。他先后用水、甘油、30％乙醇作为溶剂溶解，均告失败。经过9年时间，终于在1926年利用30％丙酮作为溶剂，取得成功，获得晶体物，具有很高的尿素活性，检验确定是蛋白质。
但是这违反了德国化学家威尔斯塔特的权威结论。威尔斯塔特在20世纪20年代制得了纯净的酵母转化酶和其他几种酶，认为酶本身不是蛋白质，而是一种低分子量的物质，吸附在非晶体的、没有什么结构的，如蛋白质类的胶体上。
但在1930~1935年，美国化学家诺思罗普和他的同事们分离出胃蛋白酶、胰蛋白酶等多种酶，获得它们的结晶，明确表明它们是蛋白质。这使化学家信服萨姆纳是正确的，而威尔斯塔特所作的酶是非蛋白质的断言是错误的。
诺思罗普和萨姆纳因此共获1946年诺贝尔化学奖。共获这一年诺贝尔化学奖的还有美国生物化学家斯坦利。他在1936年分离并结晶出烟草坏死病毒，证明它是蛋白质。
关于酶催化专一性的研究，在19世纪末20世纪初。德国有机化学家E·费歇尔提出“锁与钥匙”的理论，把酶比作锁、把反应底物比作钥匙。反应底物是指与酶直接发生作用的化合物。
这一理论基本是正确的，经修正和补充，明确酶和被作用的底物生成中间化合物，它不仅容易生成，而且容易转变成产物。

一切生物的生命活动都离不开酶，而所有的生物的体内，不论是低等生物还是高等生物，都有成千上万的酶参加生物化学的反应。虽然酶这样普遍地存在，而发现酶却是250年前的事。

1750年，意大利生物学家列俄牟尔研究了鹰的消化过程。鹰是食肉性的猛禽，有十分尖利的爪和喙，但没有牙齿，吃肉时，只把猎物撕裂，连毛带骨吞入胃中。但毛和骨在胃中经过一段时间就被消化了，这是什么东西在起作用呢？列俄牟尔设计了一个实验，对鹰的消化过程进行观察。

列俄牟尔取一个金属管，金属管内放上碎肉，两端开口处用金属丝网封住，他让鹰吞下金属管，经过一些时间，再把金属管取出。结果，发现管内充满了澄澈的液体，而碎肉却不见了。

列俄牟尔这样解释这个现象：金属管阻止了胃对碎肉的直接研磨，只有胃液可以进入金属管中，所以是胃液消化了碎肉。因此，他认为胃液中一定存在一种能消化肉的物质，但还不知道这物质是什么？

1824年，科学家斯普劳斯尔证明胃液中有酸。11年之后，德国科学家施旺从胃液中提取到一种粉末，它对肉有特别强的消化作用，但肯定不是酸。施旺称它为胃蛋白酶。酶就这样被发现了。后来又陆续发现能消化淀粉的淀粉酶以及其它多种酶。