如何下载一段音乐

肯定是开环，不然怎么连接。连接的原理就是试剂盒中的载体pMD19-T是已经经过内切酶EcoRv反应了的，并且在露出T的一端继续添加几个T，而我们的PCR反应中，在聚合酶的作用下，会在一端添加A，这样它们在反应中就很快连接成功。

跑胶估计就是用你的样品，和DNA marker中已知量的条带的亮度比例，来估算你的样品的DNA样品。这个需要一定的经验。例如一般的1KB ladder，最亮的条带在点样3微升时为50ng，那么你看你的条带的亮度大约是ladder条带亮度的10倍的话，你就知道你点的样大约是500ng了。

比例的话尽量保持在10：1~3：1间，太少会降低连接效率，拿不到克隆，太高浪费，也会造成非预料的连接结果。

明白了么？

YAC: 酵母人工染色体 230-1700Kb
BAC: 细菌人工染色体 300Kb
PAC: P1人工染色体 300Kb

2000bp的片段属于普通片段，常见载体都可以连接上，一般的普通T载体都可以使用。

可以，但是不知道你所谓的暂停了几个小时是在什么条件下暂停的。一般来说连接效果会有所降低，但是，因为每个人用的连接温度不一样，应该不影响后续试验吧。

可能是忘记打了

要去土豆网才可以看到啊，版权问题啊

我们通常用老办法，一个一个往上连，如果目的基因不大，可以先把片段叠在一起再连上去。当然，也有人用同源重组的载体一次连几个片段上去。

那得看你用多少浓度的胶跑，如果用1%的琼脂糖电泳30min，你的主带（超螺旋的闭环质粒dna）会在3kb-2kbmarker之间，如果是单酶切产物，则应该在3.5kb的marker附近。