分子克隆获取目的基因时什么时候用酶切，什么时候用PCR?
2个回答
一般你要连接的话，就酶切，你要扩增就做pcr
连接T-vector之前进行PCR得到带A的PCR产物，然后进行转化，对expression vector和质粒进行相同酶切，连接，转化。在整个clone中有时会用PCR来鉴定，如目的基因是否转入进感受态细胞。
相关问答
挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有
2中可能，1种是你的抗生素失效了，长出来都是没质粒的菌；另1种是你转化进感受态的都是空质粒。 PCR扩增有目的条带可能是因为连接产物残留的PCR片段在平板上引起的假阳性。
酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么
什么酶呢？最后酶切组的电泳条带是弥散，是只有质粒条带没有酶切产物条带，还是干脆就是空白？ 如果是弥散，最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格，因为掌握不当而产生了星号活性，导致把质粒切碎了。建议...
全文为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌
大肠杆菌是一种载体，要是因为测序的原因，获得的全长序列要经过测序验证，而目前的测序技术有限，在序列的起始端准确性不高，所以想要获得准确的全长序列就需要克隆到载体上。具体可以了解一下测序的原理。
为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后，酶切鉴定正确，而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢？着急
因为 转化过程你没出来好 加点 kml 再转化 提质后 分别切2 这样就正确了
我想问一下从PCR开始有带胶回收双酶切，载体双酶切，胶回收后怎么把载体和酶切后的基因连在一起
我们用天根公司的胶回收试剂盒，回收目的基因及载体双酶切后的产物用于连接，连接体系如下：一般载体1微升，目的基因8微升左右（没.测OD）,用T4DNA连接酶（购于TaKaRa公司）1微升，再加酶缓冲液（...
全文PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接
已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切（选要相同的限制性内切酶对两者进行切割）→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接（一般选用T4连接酶）→大肠杆菌感受态细胞的制...
全文PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑.
应为PCR扩增出来的是混合物,酶切回收后才基本是纯的目的片段. 载体一般不用PCR扩增,一般是质粒来源,也需要用切口一致的酶消化回收. 之后连起来就好了
怎样克隆基因或是克隆基因的一般步骤是什么？
一般情况下有两种方法：一、反转录法：用已知的单链mRNA反转录出一条单链的DNA，再用碱基互补配对原则合成双链DNA。二、用已知的蛋白质的多肽链推测出单链mRNA（一个氨基酸对应相应的密码子）上碱基的...
全文为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序？
补充一个更重要和实际的考虑：实际测序中，可靠的测序结果往往是从引物后二三十个碱基才开始的。如果片段比较长，超过一次测序能力如七八百之外，即使双向测序也无法获得引物（排除非特异扩增）或紧邻引物处的序列时...
全文基因克隆不出来，为什么
基因克隆是70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术，可概括为∶分、切、连、转、选。最终目的在于通过相应技术手段，将目的基因导入寄主细胞，在宿主细胞内目的基因被大量的复制。
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