假如一特异PCR扩出的基因或基因片断重组进T载体并转化大肠杆菌，如何鉴定并获得真实转化子？

2022-07-26 22:13

用重组体分子的选择与鉴定技术，试设计一个试验方案！！！

1个回答

如果你导入的是抗性基因，可以直接用选择培养基
如果不是，可以用蓝白斑筛选，蓝白斑具体方法楼上的老兄说的是对的，但是注意蓝白斑只适合T7启动子的

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1个回答2022-12-05 23:10

大肠杆菌是一种载体，要是因为测序的原因，获得的全长序列要经过测序验证，而目前的测序技术有限，在序列的起始端准确性不高，所以想要获得准确的全长序列就需要克隆到载体上。具体可以了解一下测序的原理。

3个回答2022-09-12 01:49

可以的，因为它上面有启动子T7/SP6（哪个我忘记了）。但是T载体一般不用做表达载体，因为它是靠T-A连接的（T载体上含多个T，PCR产物含多聚A），读码框未必正确，所以一般是用作中间过渡的载体，后...

4个回答2022-07-12 09:06

补充一个更重要和实际的考虑：实际测序中，可靠的测序结果往往是从引物后二三十个碱基才开始的。如果片段比较长，超过一次测序能力如七八百之外，即使双向测序也无法获得引物（排除非特异扩增）或紧邻引物处的序列时...

1个回答2022-12-12 07:14

可以的,因为它上面有启动子。但是T载体一般不用做表达载体,因为它是靠T-A连接的（T载体上含多个T,PCR产物含多聚A）,读码框未必正确,所以一般是用作中间过渡的载体,后续要把这段基因切下来（你的扩...

1个回答2022-10-08 09:44

所以一般是用作中间过渡的载体,因为它是靠T-A连接的（T载体上含多个T,读码框未必正确。但是T载体一般不用做表达载体可以的,保证读码框正确）,因为它上面有启动子,PCR产物含多聚A）,后续要把这段基因...

1个回答2022-08-22 03:57

细菌可以在某种条件下形成感受态，然后可以接受外界基因，而动物细胞的感受态很难做，或者干脆需要注射；另外细菌的细胞可以无限繁殖，动物细胞不可以。。。细菌转化的局限性在于，真核生物和原核生物的表达是不同...

1个回答2022-10-15 08:25

用钙离子处理细胞.目的是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程.

2个回答2023-01-28 07:00

因为转化过程你没出来好加点 kml 再转化提质后分别切2 这样就正确了

5个回答2022-09-14 21:04

1、这是作为保藏的手段，不然你怎么保存你的基因？ 2、这是获得自引物之间完整序列的必要途径，因为测序是无法获得待测序列起始部分和约800-1000bps之后的序列，因此需要连接到质粒上测序，俗称TA克...

1个回答2022-08-25 09:19

pcDNA3.1本身就有抗性，可以用抗性培养基进行初步筛选，然后长出来的克隆筛选，一般为三种： 1.设计扩增外源基因片段的引物，进行菌液PCR 2.提取质粒，做质粒双酶切--Hind Ⅲ和EcoRⅠ（...

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