常用的目的基因与载体的连接方法有哪些?
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目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段:
第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;(人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。)
第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后,再用DNA连接酶将它们连接起来;
第三种方法是,先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头,使之形成粘性末端之后,再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异,但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。
粘性末端DNA片段的连接
DNA连接酶最突出的特点是,它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用,形成重组的DNA分子。
平末端DNA片段的连接
常用的平末端DNA片段连接法,主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。
第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;(人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。)
第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后,再用DNA连接酶将它们连接起来;
第三种方法是,先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头,使之形成粘性末端之后,再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异,但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。
粘性末端DNA片段的连接
DNA连接酶最突出的特点是,它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用,形成重组的DNA分子。
平末端DNA片段的连接
常用的平末端DNA片段连接法,主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。
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基因工程中,载体与载体连接物,目的基因与目的基因连接物,目的基因与载体连接物分别是指什么,满意的话
经过同一种限制性内切酶切割后会产生相同的粘性末端,所以目的基因可与目的基因连接,载体可与载体连接,也有目的基因和载体连接。 用限制性内切酶切了以后,让片段自己连接,就会出现三种连接方式,然后我们选择...
全文第二小题答案中的载体与载体连接物,目的基因与载体连接物,目的基因与目的基因连接物分别是指图中哪部分
如果用同一种限制酶切割载体两端或目的基因两端,那么载体两端由于有相同的黏性末端,自身就可以连起来,同样,目的基因两端也就能够连起来,这样就达不到将目的基因连接到载体的目的。
目的基因经特定载体进行拼接重组DNA可能有: 目的基因-目的基因 目的基因-载体 载体-载体
要构建重组载体的目的就是把目的基因连到载体上,所以最有效的重组DNA是目的基因-载体。目的基因-目的基因和载体-载体都是失败的结果,这种结果的产生相对导致基因-载体的结果产生率下降。 一般做重组载体选...
全文基因克隆载体连接步骤
基因克隆的步骤: 1、获取目的基因; 2、将目的基因与载体连接; 3、重组体载入受体细胞; 4、重组体的筛选、克隆。 具体到载体连接这一步,将酶切后的载体与目的片段加入相应的连接体系中就可以了。
常用的目的基因与载体的连接方法有哪些?
目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段: 第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;(人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末...
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全文全基因合成的片段怎么连接到载体中
基因片段和载体分别用相同的限制性内切酶切割,产生相同末端,再通过连接酶连接在一起。
外源性基因与载体的连接方式有哪些
首先是T,A连接,就是现在通常使用的T载体,一般的PCR产物都在两端加个A,这样T,A相配,T4连接酶可以把他们连在一起. 第二,粘性酶切位点连接,把载体和外源基因用相同的酶进行酶切(双酶切,或者单酶...
全文如何将目的基因与已经构建好的载体拼接?
设计引物,引物两端带有设计好的酶切位点,找个有目的基因的细胞,提了ran,然后把目的片段p出来,然后跑胶,试剂盒回收目的片段。把载体和目的片段用同样的双酶切,再跑胶,回收切开的载体和目的片段,连接吧。
如何将目的基因与已经构建好的载体拼接?
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