做克隆转化时，能提出质粒,但提质粒后用引物sp6,t7无法p出条带?

2022-10-01 08:36

用试剂盒提的质粒，提出后跑电泳，有条带

1个回答

1，要确定提出来的是不是你的质粒，有条带不一定就是你的质粒。
2，确定你的PCR没有问题，PCR时放阳性对照。
3，你用的是什么载体。考虑你的引物是否正确。

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1个回答2023-01-23 11:43

无外乎于试剂盒不合适，菌液过少，或过多导致裂解不充分。试剂盒问题比较大，可以其他菌液做个对照，就很清楚了当然如果是农杆菌的话，那质粒量少是很正常的，不像大肠杆菌质粒那么容易提取出来。

1个回答2023-05-22 05:30

都有可能你可以多做几个对照,如空载体转化、空细胞涂板等等，帮助缩问题小范围你可以询问实验室其他人员，看看酶是否有问题，感受态是否有问题，抗生素是否有问题，等等按你给的线索，菌落很少，很有可能是切...

1个回答2023-01-20 06:45

你做完菌落PCR以后，电泳完要看看是不是你需要的那一条带，如果这条带是你要的话，你就要拿你用来菌落PCR的菌液拿去测序就可以了，因为我平时也是做菌落PCR，而且提取质粒是检测不出来的，但是菌落PCR以...

1个回答2023-01-12 19:57

同样的问题，我也正经历着，别着急慢慢分析原因。如果你做得是质粒的构建，我想根本的原因是没有连接上，那得重新做，考虑连接的问题。对于你的那个5天得菌液，原则上说菌液放久了，质粒可能会丢失，你可以重新...

1个回答2022-10-02 20:48

质粒含有复制起始位点（ori）以及一个控制质粒拷贝数的基因，能在相应的宿主细胞内进行自我复制，质粒上并没有复制酶基因，所以复制时需要使用宿主细胞染色体的多种酶群进行自主复制。每种质粒在相应的宿主细胞...

2个回答2023-01-20 04:12

质粒丰度太低，电泳无条带说明提取得到的质粒量太少而PCR能够扩增出来那么说明质粒已经提取出来了（前提条件是这个片段经过测序证实确实是你的目的片段）。建议：扩大提取时的初始菌量，可以尝试碱裂解法自己提...

1个回答2023-02-10 17:35

先一步步找原因。是实验步聚问题，还是试剂盒的问题，如果是试剂盒的问题，推荐您用鼎国生物的。价格应该还实惠点。

1个回答2023-01-18 18:55

同样的问题,我也正经历着,别着急慢慢分析原因. 如果你做得是质粒的构建,我想根本的原因是没有连接上,那得重新做,考虑连接的问题. 对于你的那个5天得菌液,原则上说菌液放久了,质粒可能会丢失,你可以重新...

2个回答2023-01-28 07:00

因为转化过程你没出来好加点 kml 再转化提质后分别切2 这样就正确了

1个回答2024-02-01 22:19

是的，不过我们学习的是原子，再小的有质子、中子、电子和夸克。欧洲著名的大型强子对撞机，发现了上帝粒子，并获得诺贝尔科学奖。其实宇宙是永远解不开的迷，粒子可以怎么小法，给你参考下吧：超大质量行星死亡后形...

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